ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОТОКСИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРЕПАРАТА ГЕПАКАРДИН (ЧИН 3607) НА МОДЕЛИ ОСТРОГО ГЕПАТИТА
(Studying anti-toxical features of a preparation CHIN-3607 on acute hepatitis model - Glotova S., Chuvaev I. V., Andreeva N. L.)

Глотова С., Чуваев И.В., Андреева Н.Л.

Институт Ветеринарной Биологии (Санкт-Петербург), ФГОУ ВПО "Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины"

На модели острого токсического гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом, показаны гепатопротекторные свойства препарата ЧИН 3607. Профилактическое и лечебно-профилактическое применение препарата значимо снижало токсическое действие четыреххлористого углерода на организм крысы, предотвращало снижение массы тела и уровня общего белка подопытных животных, предотвращало повышение трансаминаз сыворотки крови (АЛТ, АСТ), препятствовало снижению эритро- и лейкопоэза, а также снижению уровня гемоглобина крови испытуемых животных.

Введение

Гериатрия как ветеринарная дисциплина находится на ранней стадии развития. Как и по аналогии с некоторыми другими направлениями, гериатрия в ветеринарии начала развиваться после становления ее как дисциплины в медицине.

У животных, по сравнению с человеком, где медицинские проблемы занимают лишь пятую часть среди общих проблем пожилого возраста, а остальные относятся к категории социальных, мы (может быть, пока) уделяем внимание только проблемам с их здоровьем, возникающих с возрастом.

В 80-х – 90-х годах наблюдалась относительно высокая смертность молодняка и прежде всего из-за инфекционных заболеваний и, соответственно, средняя продолжительность жизни собак была меньше, чем в современных условиях. В зарубежных странах использование вакцин началось гораздо раньше, чем в нашей стране, как это видно из данных на конец 80-х – начало 90-х годов:  в США в 1984 г. к ветеринарам обращались владельцы домашних животных следующих возрастных групп: собаки 1 год или менее – 16 %, 2-5 лет – 41 %, 6 и более – 43 %; кошки 1 год или менее – 25 %, 2-5 лет – 44 %, 6 или более – 31 %;  в Великобритании в 1991 г. были проанализированы данные о 6417 кошках и 20776 собаках, владельцы которых обращались к специалистам: собаки менее 1 года – 19,4 %, 1-6 лет – 45,7 %, 7 или более лет – 34,9 %; кошки менее 1 года – 32,1 %, 1-6 лет – 40 %, 7 или более лет – 27,9 % [3].

Широкое использование вакцин в последние годы и в нашей стране позволило увеличить поголовье животных, причем именно за счет снижения смертности в щенячьем возрасте.

Кроме того, в процессе ретроспективного анализа данных, проведенного ветеринарной клиникой Института Ветеринарной Биологии, установлено, что за последние 10 лет возросло число обращений в клинику владельцев с собаками старшей возрастной группы (старше 7 лет) на 18,5 %. Т. е. в 1997 г. возрастной спектр собак, поступивших в клинику, был представлен: до 1 года – 37,7 %; от 1 года до 7 лет – 44 %; от 7 лет и старше – 18,3 %. В то время как в 2007 г. эти показатели составили 24 %, 40,2 % и 35,8 % соответственно. Связано это, по-видимому, не только с  улучшением  диагностических, профилактических и лечебных мероприятий, но и с изменением условий содержания животных, кормления, ответственности и грамотности владельцев.

Таким образом, наблюдается некоторая тенденция к увеличению средней продолжительности жизни собак и, соответственно, практикующим ветеринарным специалистам все чаще и чаще приходится сталкиваться с заболеваниями, характерными для стареющих животных.

На продолжительность жизни домашних животных (собак, кошек и др. плотоядных) влияет множество  факторов: кормление, содержание, болезни, наследственность, породная предрасположенность и др.

Механизм старения и его причины до конца еще не установлены, однако как в медицине, так и в ветеринарии, можно отметить ряд изменений, встречающихся преимущественно у старых животных. Эти изменения касаются  опорно-двигательного аппарата (уменьшение количества и снижение активности остеобластов, уменьшение выработки сульфата хондроитина, спондилез и реберно-хрящевой кальциноз, дегенеративные заболевания суставов и др.), печени (уменьшение количества гепатоцитов, уменьшение объема образования желчи, снижение функции печени и др.), сердца (фиброз миокарда, жировая инфильтрация, отложения амилоида в миокарде и др.), иммунной системы (инволюция лимфоузлов, иммунная недостаточность и др.) и других систем и органов организма; также повышается риск возникновения онкологических болезней.

Используемые на сегодняшний день препараты в гериатрической практике, как правило, обладают узконаправленным действием:

• нестероидные противовоспалительные средства (Римадил, Кетофен) обладают анальгезирующим и противовоспалительным действием и используются для лечения заболеваний опорно-двигательного аппарата,
• гепатопротекторы (Карсил, Лив-52) нормализуют синтез белка в печени, обладают желчегонным действием, предохраняют печень от воздействия токсических веществ,
• кардиопротекторы (Милдронат) улучшают клеточное дыхание и сократимость миокарда, увеличивают переносимость физических нагрузок,
• хондропротекторы (Артрогликан) - стимулирует процессы регенерации и замедляет дегенерацию хрящевой ткани, способствует восстановлению суставной сумки и хрящевых поверхностей суставов, стимулирует продукцию суставной жидкости, улучшает подвижность суставов, участвует в построении основного вещества костной и хрящевой ткани и др. препараты разных групп. Следует отметить, что препарат Артрогликан обладает также кардио- и гепатопротекторным свойствами [5].

В связи с этим, создание препарата, который сочетал бы в себе кардио-, гепато-, хондро- протекторные, иммуностимулирующие, антиоксидантные свойства, является актуальной задачей в современной ветеринарной фармакологии [6].

Нами был создан комплексный препарат Гепакардин (ЧИН 3607), включающий в себя экстракты растительного и животного происхождения, который, на наш взгляд, может удовлетворить поставленной задаче.

Целью настоящего исследования было изучение гепатопротекторных свойств препарата ЧИН3607.

Материалы и методы

Изучение гепатопротекторных свойств препарата Гепакардин (ЧИН 3607) проводили на крысах линии Wistar, самцах, массой 390 – 420г. Крысы были разделены на 4 группы:

1 группа – (профилактическое использование Гепакардина);  получали препарат 1 раз в сутки с кормом, в дозе 50 мг на голову, в течение 14 дней до затравки;

2 группа – (лечебно-профилактическое использование Гепакардина);  получали препарат 1 раз в сутки с кормом, в дозе 50 мг на голову,  в течение 14 дней до затравки, а также в период затравки и 5 дней после затравки;

3 группа – (активный контроль) препарат не получали, затравку четыреххлористым углеродом проходили по стандартной схеме;

4 группа – (пассивный контроль) – препарат не получали, вместо четыреххлористого углерода получали вазелиновое масло 0,4 мл/кг внутрибрюшинно.

Исследование выполняли с использованием модели острого гепатита, вызванного четыреххлористым углеродом [1].

Крысам во время затравки вводили четыреххлористый углерод 1 раз в сутки, 3 дня подряд, в форме 50% раствора на вазелиновом масле, в дозе 0,4 мл на кг массы, внутрибрюшинно.

Декапитация крыс и взятие крови проводились на 5-й день после окончания затравки.

Методами оценки эффективности действия препарата Гепакардин были клинический осмотр, измерение веса животных и контроль некоторых биохимических показателей сыворотки крови (АЛТ, АСТ, креатинин, общий билирубин, щелочная фосфотаза, общий белок), также проводили клинический анализ крови. Биохимические исследования проводили стандартными методиками с использованием полуавтоматического биохимического анализатора Stat Fax 2000.  Полученные результаты обрабатывались статистически с использованием критерия Стьюдента.

Результаты и обсуждение

В течение опыта погибли  3 крысы из группы активного контроля (на 2-й и 3-й дни затравки) и 1 крыса из 1-й группы (на 3-й день затравки). Это свидетельствует о  высоком токсическом действии четыреххлористого углерода на организм. Все крысы из групп №2 и №4 остались живы. Состояние крыс из группы №4, пассивного контроля, в течение эксперимента не менялось.

Контроль массы тела подопытных животных осуществляли до начала затравки, после третьей затравки и через пять дней после третьей затравки.  Результаты исследования представлены в таблице 1. Как представлено в таблице, за 8 суток  вес  крыс из группы № 3 (активный контроль), снизился на 3,6 %, в то время как вес крыс из группы № 4 (пассивный  контроль), увеличился на 1,8 %, что  свидетельствует о выраженном  токсическом действии четыреххлористого углерода на организм подопытных животных. Масса тела крыс 1-й группы,  увеличилась на 1,5 %, 2-й группы - на 5,9 %, что почти в 3 раза больше, чем в у крыс 3-й группы.

Биохимические исследования сыворотки крови испытуемых животных представлены в таблице 2.

Как представлено в таблице,  под воздействием четыреххлористого углерода происходит значительное увеличение таких показателей как АЛТ, АСТ в группе № 3 по сравнению с группой № 4, что может отражать токсическое поражение гепатоцитов и , возможно, кардиомиоцитов [2]. В группах № 1 и 2 значимых различий по сравнению с группой № 4 (пассивным контролем)  по этим показателям не наблюдалось.

Таблица 1. Изменение массы тела крыс под воздействием трехкратной затравки четыреххлористым углеродом  (среднее по группам) 

Таблица 2. Влияние профилактического и лечебно-профилактического применения  препарата ЧИН 3607 на изменение некоторых биохимических показателей сыворотки крови  крыс на фоне  трехкратной затравки четыреххлористым углеродом  (среднее по группам)

Примечания: *- значения достоверные в сравнении с пассивным контролем р<0,05; **- значения достоверные в сравнении с активным контролем  р<0,05

Таблица 3. Влияние профилактического и лечебно-профилактического применения  препарата ЧИН 3607 на изменение некоторых гематологических показателей  крови  крыс на фоне трехкратной затравки четыреххлористым углеродом 

Примечания: *- значения достоверные в сравнении с пассивным контролем р<0,05; **- значения достоверные в сравнении с активным контролем  р<0,05

Изменение содержания креатинина в группе № 3, по сравнению с остальными группами имело некоторую (не достоверную),  тенденцию к увеличению, особенно по сравнению с пассивным контролем (группой № 4), что может говорить о возможном нефротоксическом действии четыреххлористого углерода.

Уровень общего билирубина в крови, по проведенными нами ранее исследованиям по испытанию модели данного опыта, повышался только на  14-15  день, поэтому оценку данного показателя  в проводившемся исследовании сыворотки крови на 8-й день мы сочли не целесообразным.

Значительное снижение уровня щелочной фосфатазы (в 2 раза) в группе № 3 по сравнению с группой № 4 может говорить об ослаблении остеобластических процессов  при интоксикации четыпеххлористым углеродом; острый некроз гепатоцитов может и не сопровождаться повышением активности ЩФ, если при этом не происходит сдавления желчных протоков [4]. В группах № 1 и 2 снижение уровня щелочной фосфатазы было в 1,5 раза.

Снижение общего белка в  сыворотке крови крыс группы № 3 (54,4 г/л), по сравнению с группой № 4 (63,1 г/л) может говорить так же о токсическом поражении печени. В группе № 2 наблюдалось незначительное снижение белка (62,5 г/л), а в группе № 1 – незначительное повышение  (68,4 г/л).

Результаты клинического анализа крови представлены в таблице 3.

Как следует из результатов представленных в таблице, в крови крыс группы № 3 наблюдалось значительное снижение эритроцитов, по сравнению с пассивным контролем (группой № 4), что может быть результатом токсического действия четыреххлористого углерода на эритропоэз. Таrже наблюдалось снижение уровня гемоглобина в группе № 3 по сравнению с группой № 4, что может быть следствием токсической анемии. В группах же № 1 и 2  уровень гемоглобина не только не снизился, но и имел некоторую тенденцию к повышению. Уровень эритроцитов в крови крыс группы № 1 и № 2 был также несколько выше чем в группах активного и пассивного контроля.

У крыс группы № 3 наблюдалась значительная лейкопения в  сравнении с крысами группы № 4, что может говорить о иммунносупрессивном действии четыреххлористого углерода.  Уровень лейкоцитов в крови крыс групп № 1 и 2 оказался выше по сравнению с группой пассивного контроля №4.

Выводы

1. Трехкратное введение четыреххлористого углерода в дозе 0,4 мл/кг массы тела, внутрибрюшинно, 1 раз в сутки, 3 дня подряд, в форме 50 % раствора на вазелиновом масле приводило  к снижению веса (-3,6 %)  испытуемых  животных; повышению уровня АЛТ и АСТ в 3,37 и 1,85 раза соответственно, повышению уровня креатинина в 1,08 раза, понижению щелочной фосфатазы в 1,98 раза, понижению общего белка в 1,16 раза. Кроме того, наблюдались следующие изменения в крови этой группы животных, а именно:  количество эритроцитов понизилось в 1,22 раза, лейкоцитов в 1,4 раза, уровень гемоглобина снизился в 1,08 раза.
2. Профилактическое применение препарата Гепакардин (ЧИН 3607)  в течение 14 дней до затравки, выявило, что интоксикация четыреххлористым углеродом не только не приводила  к снижению массы тела  подопытных животных, но и наблюдалась тенденция к увеличению в весе (+1,5 %)  в сравнении с изначальной массой тела животных. Содержание трансаминаз  крови  (АЛТ, АСТ) было достоверно ниже чем в группе № 3 и практически не отличались от группы пассивного контроля. Уровень креатинина не имел тенденции к росту, уровень щелочной фосфатазы имел тенденцию к снижению, а уровень общего белка соответствовал значениям характерным для животных группы пассивного контроля.
   Профилактическое применение препарата ЧИН 3607 предотвращало снижение эритро-  и  лейкопоэза, а так же препятствовало снижению уровня гемоглобина крови испытуемых животных. 
3. Лечебно-профилактическое применение препарата Гепакардин (ЧИН 3607) в течение 14 дней до затравки, а так же в течение 3-х дней затравки и 5 дней после, не только предотвращало снижение массы тела животных под воздействием четыреххлористого углерода, но и  выявило выраженную тенденцию к увеличению массы тела - на 5,9 %.
   Содержание трансаминаз сыворотки крови испытуемых животных  (АЛТ и АСТ) не отличалось от фоновых значений, в то время как для группы №3 эти значения были в несколько раз выше фоновых.
   Уровень креатинина не имел тенденции к увеличению,  уровень щелочной фосфатазы имел тенденцию к снижению, а уровень общего белка соответствовал значениям характерным для животных группы пассивного контроля.
   Лечебно-профилактическое применение препарата Гепакардин (ЧИН 3607) предотвращало снижение эритро-  и  лейкопоэза, а так же препятствовало снижению уровня гемоглобина крови испытуемых животных. 
4. Препарат Гепакардин (ЧИН 3607) обладает выраженными противотоксическими (гепатопротекторными) свойствами в условиях острого токсического гепатита, вызванного применением четыреххлористого углерода.

Summary

On model of a sharp toxic hepatitis are shown hepato-protective properties of a preparation CHIN-3607. Preventive and treatment-and-prophylactic application of a preparation significantly reduced toxic action of four-chloride carbon on an organism of a rat, prevented decrease of weight and level of the general fiber of experimental animals, prevented the decrease of eritro- and leukopoiesis and level of haemoglobin of blood.

Список литературы

1. Батрак Г. Е., Кудрин А. Н. Дозирование лекарственных средств экспериментальным животным. М., 1979 г., С. 140.
2. Бочков В. Н., Добровольский А. Б., Кушлинский Н. Е., Логинов В. А., Панченко Е. П., Ратнер Е. И., Творогова М. Г., Титов В. Н., Ткачук В. А. Клиническая биохимия. М., 2004 г., С. 363.
3. Дейвис Майк. Гериатрия собак и кошек. М., 2002 г., С. 12.
4. Камышников В. С. Справочник по клинико-биохимическим исследованиям и лабораторной диагностике. Часть II. Методы клинической химиии и интерпретация получаемых с их использованием результатов. С. 358.
5. Чуваев И. В., Ипатьева С. В. Возможность использования Артрогликана как герантологического препарата. Новые ветеринарные преапараты и кормовые добавки; 17-я экспресс-информация. С-Пб., 2006 г. С. 31.
6. Чуваев И. В., Соколов В. Д., Глотова С. В. Необходимость изыскания гериатрических средств для плотоядных. Материалы XIX международной научно-практической конференции по фармаклогии и токсикологии. С-Пб., 2007 г. С. 10.